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荧光分光光度法在多维片中维生素B2含量测定上的应用

日期: 2017-07-24
浏览次数: 1241
案例名称: 荧光分光光度法在多维片中维生素B2含量测定上的应用

摘要:维生素B2又名核黄素,在食品中以游离形式或磷酸酯等结合形式存在。膳食中的主要来源是各种动物性食品,其次是植物性食品的豆类和新鲜绿叶蔬菜。检测其含量也有着许多的方法,其中荧光分光光度法是对荧光物质进行定性和定量的有效方法,它是维生素B2含量测定的一个比较常用的方法。

本文以测定多维片中维生素B2(核黄素)元素含量为例,依据GB/T 5009.85-2003《食品中核黄素(维生素B2)的测定》,应用港东F-380型荧光分光光度计对多维片中维生素B2含量进行测定。结果证明此方法操作简便,线性良好是测定多维片中维生素B2含量的理想方法。



关键词:荧光分光光度法 维生素B2核黄素 多维片


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· 原理

核黄素在 440nm~500nm 波长光照射下发生黄绿色荧光。在稀溶液中其荧光强度与核黄素的浓度成正比。在波长 525nm 下测定其荧光强度。试液再加入低亚硫酸钠(Na 2 S 2 O 4 ),将核黄素还原为无荧光的物质,然后再测定试液中残余荧光杂质的荧光强度,两者之差即为多维片中核黄素所产生的荧光强度。

·实验条件

1、仪器及附件:

天津港东 F-380 型荧光分光光度计

荧光石英比色皿

2、分析条件:

激发波长:440nm

发射波长:525nm

3、药品:

硅镁吸附剂(60~100 目)、乙酸钠、木瓜蛋白酶、淀粉酶、盐酸、氢氧化钠、低亚

硫酸钠(Na 2 S 2 O 4 )、洗脱液(丙酮、冰乙酸、水)、高锰酸钾、过氧化氢、核黄素标准溶液(纯度 98%)等。

4、其他:

电热恒温培养箱、高压消毒锅、分析天平(0.0001g)、容量瓶、盐基交换柱、三角瓶、瓷坩埚、移液管、刻度试管、具塞比色管、试管架、擦镜纸、滴管、量筒、磁力搅拌器、pH 计等。


·样品及标准样品处理

特别注意:整个操作过程需避光进行

1、样品溶液的制备

(1)样品提取

① 水解

荧光分光光度法在多维片中维生素B2含量测定上的应用


② 酶解

荧光分光光度法在多维片中维生素B2含量测定上的应用

③ 过滤

荧光分光光度法在多维片中维生素B2含量测定上的应用


(2)氧化去杂质

荧光分光光度法在多维片中维生素B2含量测定上的应用

(3)核黄素的吸附和洗脱

荧光分光光度法在多维片中维生素B2含量测定上的应用

2、标准溶液的制备

(1)核黄素标准储备液(25μg/mL):

将标准品核黄素粉状结晶置于真空干燥器或盛有硫酸的干燥器中。经过 24 小时后,

准确称取精确称取 50mg,置于 2L 容量瓶中,加入 2.4mL 冰乙酸和 1.5L 水。将容量瓶置

于温水中摇动,待其溶解,冷至室温,稀释至 2L,移至棕色瓶内,加少许甲苯盖于溶液表面,于冰箱中避光保存。


(2)核黄素标准使用液(1μg/mL)

吸取 2.00mL 核黄素标准储备液(25μg/mL),置于 50mL 棕色容量瓶中,用水稀释至

刻度。避光,贮存于 4℃冰箱,可保存一周。


3、空白溶液

待测试样及标准的荧光值测量后,在各管的剩余液(约 5~7mL)中加入 0.1mL20%的低亚硫酸钠溶液(Na 2 S 2 O 4 ),立即混匀,在 20s 内测出各管的荧光值,作为各自的空白值。


·测定结果

应用港东 F-380 型荧光分光光度计的“波长扫描”模块,分别读取待测溶液荧光强度,根据计算公式得到样品维生素B 2 的含量。


荧光分光光度法在多维片中维生素B2含量测定上的应用

荧光分光光度法在多维片中维生素B2含量测定上的应用

·测定结果

应用港东 F-380 型荧光分光光度计的“光度测定”模块,分别读取待测溶液的荧光强度,根据计算公式得到样品维生素B2的含量。


·结论

采用荧光分光光度法测定多维片中维生素B2含量,操作简单,方法准确,是一种理想的方法。

由于维生素B2待测液遇光不稳定,因此实验对仪器的功能要求高。港东 F-380 型荧光分光光度计率先在硬件上采用了激发侧挡光快门的设置,从而避免了样品被强光的直接照射,使整个实验操作简便,结果重现性良好。



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